云舟生物提供可应用于体外和体内实验的现货IVT mRNA和LNP-mRNA。我们的mRNA和LNP经过验证，可作为您的mRNA实验对照组或者用于估算你的LNP-mRNA递送体系的效率。更多IVT mRNA的和LNP-mRNA制备服务，请参照mRNA基因递送解决方案。对于规模化生产mRNA药物，请参照我们的CDMO服务页面。
亮点
运输与保存
我们的mRNA产品存储于1 mM柠檬酸钠缓冲液（pH 6.4），并以干冰形式发货。mRNA可在-80℃下保存12个月。请避免反复冻融mRNA。
IVT mRNA制备与质量控制
图1 体外转录合成mRNA的典型流程
我们的IVT mRNA制备首先从设计和合成模版DNA序列开始，并考虑一系列因素如密码子选择、GC含量、热力学稳定性、RNA二级结构 等，然后将其克隆到体外转录载体中。然后对质粒DNA进行纯化、验证和线性化，然后进行体外转录反应，从而产生所需 的转录本。我们通过引入修饰的核苷酸，有助于改善mRNA的体内的翻译效率并减低免疫反应。我们采用共转录或者酶促 法进行mRNA加帽，效率可达95%以上。经过磁珠纯化后的mRNA还会通过一系列QC验证以保证终产品的质量。
典型的IVT mRNA质检结果
图2 典型的IVT mRNA质检结果
（A）IVT mRNA的完整性通过变性凝胶电泳鉴定。实验结果可见符合分子量大小的锐利条带。（B）经过生物素化的5’ RNase H处理和亲和富集，IVT mRNA的加帽效率采用液相质谱（LC-MS）分析。帽子相关的切割产物可以用不同的质量数值进行分辨。逆卷积质谱的质量峰值的下方区域被计算为cap 1结构的比例。
典型的LNP-mRNA质检结果
云舟生物针对LNP-mRNA的质检测试包括多种方法检验纯度、递送效果、以及稳定性。对于现货LNP-mRNA，默认的质检测试包括粒径、PDI、zeta电势和封装效率（EE%）。
云舟生物的LNP经过优化，可以获得非常低的PDI值（PDI<0.1）。此外，对于云舟生物生产的所有LNP-mRNA，我们保证LNP的zeta电势在-10 mV到+10 mV。
图3 典型的LNP-mRNA质检结果
（A）粒径通过动态光散射（DLS）测定。该方法可以测量粒子运动带来的散射光强度的波动变化。多分散指数（PDI）反映的则是样本中的粒子尺寸的异质性。（B）Zeta电势反映了LNP的稳定性。样本中的Zeta电势范围在-1.872到+1.872 mV之间。
使用说明书
Cap 0是指将N7甲基鸟苷（m7G）以5'至5'三磷酸连接的方式添加到真核mRNA的5’端。这种修饰是通过一系列共转录酶促反应添加的，其功能是调节细胞核输出、转录稳定性，并通过真核翻译起始因子（eIF4E）的识别促进mRNA的翻译。Cap 1是指除了m7G Cap之外，进一步在转录mRNA序列的第一个核苷酸（m7GpppNm）的2' O上添加甲基。在哺乳动物细胞中，Cap 1结构是mRNA被识别为自身而非先天免疫靶向的重要标志。在合成的mRNA中添加Cap 1结构可以增强体内mRNA的表达并降低其免疫原性。
体外转录mRNA的5'帽子可以以加入Cap类似物共转录的方式添加，也可以通过酶促反应在转录后添加。我们提供了两种加帽方式，其效率已通过LC-MS验证表现良好。根据客户首选的加帽方法，我们将从一开始就选择。
细胞包含位于胞质的和内涵体的两类RNA受体，它们在识别外源RNA时将激活免疫反应。修饰核苷酸通常存在于细胞的内源性RNA中。在IVT mRNA中加入某些修饰的核苷酸可降低其免疫原性，改变二级结构，并以序列依赖的方式提高翻译效率和延长半衰期。我们提供了多种类型的修饰核苷酸，包括常用的N1-甲基假尿苷（m1Ψ）和5-甲基胞苷（m5C）。N1-甲基假尿苷和5-甲基胞苷是最早发现的天然来源是 tRNA，然而，它们在mRNA中的功能直到最近才得到重视。尿苷和胞苷的这些甲基化衍生物可以在mRNA IVT和翻译中取代它们使用的默认核苷，而不改变传统的Watson-Crick碱基配对。在mRNA治疗中使用它们的一个主要优势是它们能够帮助RNA规避免疫受体的识别，从而减轻不必要的免疫反应，增强转录稳定性和翻译效率。
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